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多抗较单抗的劣势是什么?

易于产生批次间差异,重新制备成本高。b. 产生大量非特异性抗体,有时可能在某些应用中产生背景信号。

多抗较单抗的优势是什么?

a.首次制备成本低廉,制备所需技术要求不高,制备周期短。
b. 能识别一个抗原上的多个表位,可在IP等实验中获得更好的结果。
c. 多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子,有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。
d. 能识别出与免疫原蛋白质具有高同源性的蛋白质,或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白,例如当未测试物种中的抗原性质未知时,有时会使用多克隆抗体。
e. 可识别多个结构域,即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化,仍可以识别抗原,因此有更大的适应性。

多抗和单抗的区别?

多抗是多个B细胞克隆产生的针对多种抗原表位的多种抗体混合物,
单抗是一个B细胞克隆产生的针对一种抗原表位的的单一抗体。

高背景或阴性对照值偏高

1、阴性对照孔被阳性对照或样品污染:洗涤时,勿将洗液溢出孔外。
2、抗体非特异性结合:封闭液不适合,更换封闭液。
3、酶结合物过浓:请检查酶结合物是否按说明书规定稀释。
4、孵育温度过高:检查孵育箱的温度是否正确、稳定。
5、底物在使用前曝光:应保存在暗处,避光。
6、读板前停留时间过长:加终止液后3分钟内读数。

阳性对照值偏低或低吸光度

1、试剂未平衡至室温:实验开始前,将试剂盒从冰箱取出平衡至室温。
2、检测体积偏小:检查移液器吸液管道是否堵塞。
3、孵育时间过短:使用计时器,准确孵育时间。
4、底物受污染:使用新配置的试剂,重新实验。
5、包装袋中有湿气:检查袋中是否有干燥剂。
6、样本中有抑制剂:叠氮钠会抑制HRP酶的活性。

边缘效应

1、蒸发:各步之间,须使用封版胶密封反应板。
2、温度不均匀:校准孵育箱,勿叠放反应板。

标准曲线不佳

1、倍比稀释标准品时未混匀:稀释标准品的每一步均需混匀。
2、过早稀释:标准品在快要使用时稀释。
3、加入的体积不正确:使用校准过的移液器,快速、等量的将标准品分配到各个微孔中。

标准曲标准曲线良好,但样本无检测信号

1、样本中无检测物或检测物含量极低:设置内参,重新实验。
2、样本中其他物质影响/掩盖检测:作适当稀释,降低其他物质的干扰,或作系列稀释,检测回收率。
3、样本中检测物浓度过高,Hook效应导致假低值:适当倍数稀释样本,检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。

重复性较差

1、微孔中有气泡:用针尖挑破气泡。
2、试剂未混匀:确保充分混匀试剂。
3、样本中有杂质或沉淀物:使用前离心。
4、微孔包被面被吸头划破:加液时小心操作。
5、使用用过的封板胶纸:每次须使用新的封板胶封住反应孔

假阳性反应

1、洗涤不充分:使用前需检查洗板机是否正常工作。
2、洗板机管道堵塞:需经常维护洗板机。
3、加结合物时,洒在微孔边缘:小心向微孔加入结合物,加入微孔底部中央,避免与孔壁和边缘接触。
4、检测样本中含有红细胞:离心。
5、微孔中液体挥发:用封板胶密封反应孔,置于湿盒内。

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